本文摘要:蛋白质净化的一般程序分离,纯化特定蛋白质的一般程序可分为事前处置、细分水平和细分水平三个阶段。

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蛋白质净化的一般程序分离,纯化特定蛋白质的一般程序可分为事前处置、细分水平和细分水平三个阶段。前妻分离纯化某些蛋白质,首先要将蛋白质从原来的组织或细胞中释放到沉淀状态,保持原来的自然状态,以免失去生物活性。

为此,动物材料应先去除结缔组织和脂肪组织,种子材料应先去皮或去除种皮,使其不被单宁等物质污染,油料种子用低沸的有机溶剂(如乙醚等)脱脂剂。然后根据情况自由选择必要的方法,粉碎组织和细胞。

动物的组织和细胞可以用电动粉碎机或均质器打碎,也可以用超声波打碎。植物的组织和细胞是由纤维素、半纤维素、果胶等物质组成的细胞壁,一般用石英砂或玻璃粉和必要的萃取液研磨的方法或纤维素酶处理也可能超过目的。细菌细胞的分裂比较困难。因为整个细菌细胞壁的骨骼本质上是共价键连接的聚糖囊形状的大分子,非常坚固。

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打破细菌细胞壁的一般方法有超声波破碎、砂子抛光、高压破裂、溶菌酶处理等。组织和细胞破裂后,自由选择所需的缓冲液,提取所需的蛋白质。

细胞碎片等不溶物用离心或过滤器去除。如果所需蛋白质主要集中在细胞核、染色体、核糖体、可溶性细胞质等特定细胞组中,则可以用差速器离心机分离,将该细胞组收集为细化到下一阶段的材料。

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如果所需蛋白质与细胞膜或膜质细胞器融合,应利用超声波或洗涤剂分解膜结构,然后提取为所需介质。获得细分级分离蛋白质提取液(有时称为核酸、多糖等)后,将所需的方法集与其他所谓蛋白质分离。一般来说,这一阶段的分离是通过盐析、等电点溶解、有机溶剂等级分离等方法分离的。

这些方法的特点是简单,吞吐量大,可以去除大量杂质,稀释蛋白质溶液。部分蛋白质提取液大小小,不适合用溶解或盐析法稀释,可以使用超滤器、凝胶过滤器、冷藏真空湿气或其他方法稀释。粗糙等级分离样品按粒度分离后,一般体积小,所谓蛋白质大部分已经去除。

更纯粹的是,一般有凝胶过滤器、溶胶层分析、导电层分析、亲和层分析等。适当的话,可以选择电泳法,还可以将乐队电泳、等电点审查等纳入最终净化阶段。

用作粗糙等级分离的方法通常很小,但分辨率很高。结晶是蛋白质分离纯化的最后阶段。

结晶过程并不保证蛋白质一定相同,但只有某些蛋白质在溶液中数量上占优势时才能形成结晶。结晶过程本身也预示着一定程度的提纯,再结晶可以去除少量混合的蛋白质。由于在结晶过程中没有找到变性蛋白质,蛋白质的结晶不仅是纯度的标记,也是推测产品处于自然状态的有力指标。

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